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¿Qué es la HPLC en fase reversa y por qué se usa con péptidos?
La respuesta corta
La cromatografía líquida de alta resolución en fase reversa separa una mezcla según con qué fuerza se adhiere cada componente a una columna apolar mientras un gradiente de disolvente lo arrastra. Los péptidos separan bien por este mecanismo, el equipo está muy extendido y las farmacopeas construyen sus métodos sobre él.
En detalle
En la práctica se inyecta la muestra, los componentes viajan a velocidades distintas y un detector UV registra qué sale y cuándo. El resultado es un cromatograma: picos ordenados en el tiempo, cuyas áreas se integran para dar la pureza y cuya posición identifica compuestos frente a un patrón.
Su fuerza es la resolución y la reproducibilidad. Su límite es que identifica por comportamiento, no por masa, y de ahí que la identidad por tiempo de retención sea presuntiva y la espectrometría de masas sea el paso confirmatorio.
Nuestro método completo, con la química de la columna, el gradiente y la longitud de onda, está publicado en vez de descrito en términos generales.
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